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外泌體提取純化的方法都有哪些

  • 發(fā)布日期:2021-10-23      瀏覽次數(shù):1627
    •   外泌體是大小30-200nm的膜性小囊泡,在血液、尿液、羊水、惡性腫瘤、腹水等體液及細(xì)胞培養(yǎng)上清中均存在。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)和功能性的RNA等生物活性分子,和體內(nèi)多種疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。因外泌體攜帶重要的生物信息,使它具有很重要的潛在應(yīng)用價(jià)值,一方面外泌體可以作為疾病的診斷標(biāo)志物,另一方面外泌體可以作為一種治療手段,未來(lái)有望通過(guò)外泌體載藥用于疾病的治療。正因如此,外泌體的研究持續(xù)高熱度。
        外泌體研究的首要任務(wù)是對(duì)外泌體進(jìn)行提取純化,提取外泌體的方法很多,那哪種方法提取外泌體呢?
        一、超速離心方法
        原理:基于不同顆粒密度、沉降系數(shù)不同,利用低速離心和高速離心交替進(jìn)行的方法分離外泌體顆粒。
        優(yōu)點(diǎn):文獻(xiàn)引用較多,如實(shí)驗(yàn)室設(shè)備條件滿足,可省成本
        缺點(diǎn):需要大型離心機(jī),高離心力會(huì)損傷外泌體;操作耗時(shí);步驟繁瑣;產(chǎn)量不穩(wěn)定(受轉(zhuǎn)子、轉(zhuǎn)速、起始樣本量等多因素影響);起始樣本量需求高
        二、密度梯度離心
        原理:在超速離心力的作用下,使氯化銫或蔗糖等介質(zhì)形成密度階層,通過(guò)密度梯度離心,讓外泌體沉降在某一個(gè)密度范圍。
        優(yōu)點(diǎn):純度相對(duì)較高
        缺點(diǎn):操作非常復(fù)雜且耗時(shí),需要大型離心機(jī)
        三、免疫磁珠法
        表面包被標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后,特異性識(shí)別外泌體特異性標(biāo)志物(CD9、CD81、CD63等)。
        優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)單、純度較高
        缺點(diǎn):成本高;產(chǎn)量少,只能收集一類exosome,損失多;步驟繁瑣;種屬特異性限制;需要磁力架和冷凍離心機(jī)等儀器
        四、PEG沉淀法
        聚乙二醇(PEG)可與水分子形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),捕獲一定粒徑大小的外泌體顆粒。
        優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)單;不需要大型離心機(jī)等儀器
        缺點(diǎn):市面上品牌眾多,大多可靠性差;發(fā)表文章易受質(zhì)疑等。

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